标准GB 5009.296-2023的前身是GB 5009.82-2016,现在食品中维生素A、E继续使用标准GB 5009.82-2016,维生素D单独实行标准GB 5009.296-2023。本文将重点介绍GB 5009.296-2023标准中3个方法实验中的注意要点,与大家分享与交流。
在方法解读之前,可以先了解下维生素D来源和性质,在后续实验中才能更好的提取目标物。
一、维生素D的来源:
二、维生素A、D、E性质
维生素 | 氧化性 | 酸性 | 碱性 | 金属离子 | 光照 | 加热 |
维A醇 | 不稳定 | 不稳定 | 稳定 | 不稳定 | 不稳定 | 稳定 |
维生素D2 | 不稳定 | 不稳定 | 较稳定 | 不稳定 | 不稳定 | 稳定 |
维生素D3 | 不稳定 | 不稳定 | 较稳定 | 不稳定 | 较不稳定 | 不稳定 |
维生素E | 不稳定 | 稳定 | 较稳定 | 不稳定 | 不稳定 | 稳定 |
三、第一法 正相色谱净化-反相液相色谱法的注意要点
1、取样量严格按照标准的不同基质的取样量,因为干法工艺,取样量少会影响均匀性。
2、上机前,为了保护正向硅胶柱,提取液水洗后,必须用无水硫酸镁钠粉末脱水至无水状态。
3、为保证仪器灵敏度,正向色谱进样量:500μL;反相色谱进样量:100μL;
4、浓缩时,大体积石油醚待浓缩液,可选用莱奥12位全自动氮吹浓缩仪,可支持自动定容到1ml,再氮吹到近干;大体积氮吹时,实验员可解放双手,无需值守,并且确保氮吹不会吹到干。防止维生素D附着壁上,影响回收率。
Leowlab SmartVap N12
莱奥12位全自动定量浓缩仪
5、内标法和外标法的选择?首先确定样品是否含有维生素D2和D3.
四、第二法 在线柱切换-反相液相色谱法的注意要点
1、关注仪器灵敏度问题,根据取样量、定容体积、进样量、检测器灵敏度、检出限综合考虑。
2、固相萃取柱填料可选HLB,重点要保证较大的柱容量,耐碱性、耐压性,由于样液皂化条件是碱性的,待净化液属于碱性。
3、标准提到的奶粉、油脂含量高的肉类、粘稠的蜂蜡等制品属于复杂类基质,需要过柱压力较大,选用莱奥48位正压固相萃取仪,针对以上复杂基质,压力相比真空泵负压装置,最高可达100psi,可以轻松快速过柱。
4、固相萃取可选择莱奥48位正压固相萃取仪,可取代实验室常用的真空泵负压萃取装置,能大大缩短萃取时间,提高萃取效率,达到很好的平行性及回收率。
Leowlab Purifier A48
莱奥48位正压固相萃取仪
5、固相萃取仪后的液体,加入适量水,主要是克服色谱溶剂效应,改善峰型;
6、一维色谱柱可选用 PFP(五氟苯基)填料,在同时分离生育酚异构体时使用。
7、二维色谱柱可选PAH(多环芳烃)或固醇类分析C18柱。
8、捕集取柱可选C18或C8,粒径可采用10μm填料,柱长可选用到30mm
五、第三法 液相色谱-串联质谱法的注意要点
1、选择硅胶基质的固相萃取柱,需要注意防水,活化则选择有机溶剂进行活化。
2、同位素内标的选择:维生素 D2-d3、和维生素 D3-d3;,也可使用维生素D2-d6。和维生素 D3;-d6。可综合考虑成本;
3.质谱检测的离子化效率的评估实验必须开展,对于不同的基质,样品是不一样的。
4.质控样品的跟进是必要的,才能验证做的样本结果的准确性。
5、标准提到的奶粉、油脂含量高的肉类、粘稠的蜂蜡等制品属于复杂类基质,需要过柱压力较大,选用莱奥48位正压固相萃取仪,针对以上复杂基质,压力相比真空泵负压装置,最高可达100psi,可以轻松快速过柱。
Leowlab Purifier A48
莱奥48位正压固相萃取仪
六、关于我们
氮气发生器
正压固相萃取仪&氮吹仪
广州莱奥实验室科技有限公司总部位于广州,是一家专注于有机质谱供气及前处理仪器的高科技企业。
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