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食品中维生素D的测定GB 5009.296-2023标准解读

更新时间:2024-09-23      点击次数:230

         标准GB 5009.296-2023的前身是GB 5009.82-2016,现在食品中维生素A、E继续使用标准GB 5009.82-2016,维生素D单独实行标准GB 5009.296-2023。本文将重点介绍GB 5009.296-2023标准中3个方法实验中的注意要点,与大家分享与交流。

        在方法解读之前,可以先了解下维生素D来源和性质,在后续实验中才能更好的提取目标物。


一、维生素D的来源:

 image.png

 

二、维生素A、D、E性质

维生素

氧化性

酸性

碱性

金属离子

光照

加热

维A醇

不稳定

不稳定

稳定

不稳定

不稳定

稳定

维生素D2

不稳定

不稳定

较稳定

不稳定

不稳定

稳定

维生素D3

不稳定

不稳定

较稳定

不稳定

较不稳定

不稳定

维生素E

不稳定

稳定

较稳定

不稳定

不稳定

稳定

 






三、第一法 正相色谱净化-反相液相色谱法的注意要点

1、取样量严格按照标准的不同基质的取样量,因为干法工艺,取样量少会影响均匀性。

2、上机前,为了保护正向硅胶柱,提取液水洗后,必须用无水硫酸镁钠粉末脱水至无水状态。

3、为保证仪器灵敏度,正向色谱进样量:500μL;反相色谱进样量:100μL;

4、浓缩时,大体积石油醚待浓缩液,可选用莱奥12位全自动氮吹浓缩仪,可支持自动定容到1ml,再氮吹到近干;大体积氮吹时,实验员可解放双手,无需值守,并且确保氮吹不会吹到干。防止维生素D附着壁上,影响回收率。

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Leowlab SmartVap N12

莱奥12位全自动定量浓缩仪

5、内标法和外标法的选择?首先确定样品是否含有维生素D2和D3.

 

四、第二法 在线柱切换-反相液相色谱法的注意要点

1、关注仪器灵敏度问题,根据取样量、定容体积、进样量、检测器灵敏度、检出限综合考虑。

2、固相萃取柱填料可选HLB,重点要保证较大的柱容量,耐碱性、耐压性,由于样液皂化条件是碱性的,待净化液属于碱性。

3、标准提到的奶粉、油脂含量高的肉类、粘稠的蜂蜡等制品属于复杂类基质,需要过柱压力较大,选用莱奥48位正压固相萃取仪,针对以上复杂基质,压力相比真空泵负压装置,最高可达100psi,可以轻松快速过柱。

4、固相萃取可选择莱奥48位正压固相萃取仪,可取代实验室常用的真空泵负压萃取装置,能大大缩短萃取时间,提高萃取效率,达到很好的平行性及回收率。

 

透明底48.png

Leowlab Purifier A48

莱奥48位正压固相萃取仪

img3 

5、固相萃取仪后的液体,加入适量水,主要是克服色谱溶剂效应,改善峰型;

6、一维色谱柱可选用 PFP(五氟苯基)填料,在同时分离生育酚异构体时使用。

7、二维色谱柱可选PAH(多环芳烃)或固醇类分析C18柱。

8、捕集取柱可选C18或C8,粒径可采用10μm填料,柱长可选用到30mm

 

五、第三法 液相色谱-串联质谱法的注意要点

1、选择硅胶基质的固相萃取柱,需要注意防水,活化则选择有机溶剂进行活化。

2、同位素内标的选择:维生素 D2-d3、和维生素 D3-d3;,也可使用维生素D2-d6。和维生素 D3;-d6。可综合考虑成本;

3.质谱检测的离子化效率的评估实验必须开展,对于不同的基质,样品是不一样的。

4.质控样品的跟进是必要的,才能验证做的样本结果的准确性。

5、标准提到的奶粉、油脂含量高的肉类、粘稠的蜂蜡等制品属于复杂类基质,需要过柱压力较大,选用莱奥48位正压固相萃取仪,针对以上复杂基质,压力相比真空泵负压装置,最高可达100psi,可以轻松快速过柱。

 透明底48.png

Leowlab Purifier A48

莱奥48位正压固相萃取仪

六、关于我们

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氮气发生器

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正压固相萃取仪&氮吹仪

 

广州莱奥实验室科技有限公司总部位于广州,是一家专注于有机质谱供气及前处理仪器的高科技企业。

团队人员拥有十几年的质谱仪、前处理仪器、氮气发生器从业经历。公司服务于全国食品、制药、临床检验、环境、司法鉴定、科研院所等行业。

 


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