固相萃取（SPE）新手常犯的5个错误，你中了几个？

【导语】

固相萃取（SPE）看似简单——活化、上样、淋洗、洗脱，四步搞定。

但实际做下来，回收率低、重现性差、峰形异常……问题往往不在柱子，而在操作细节。

以下这5个常见“坑"，看看你有没有踩过 👇

❌ 错误一：活化/平衡溶剂用量或顺序不对

常见问题：

·       只用甲醇活化，忘了用上样缓冲液平衡；

·       活化后柱床干涸（空气进入填料）；

·       有机相比例与上样液差异过大，未重新平衡。

正确做法：

·       先用强洗脱溶剂（如甲醇）润湿填料；

·       再用与上样液相同 pH / 离子强度 / 有机相比例 的缓冲液平衡；

·       保持液面始终高于填料，防止柱床干裂。

📌 柱床一干，回收率基本就废了。

❌ 错误二：上样体积过大或流速太快

常见问题：

·       为省时间加大流速（> 1–2 mL/min）；

·       上样体积远超柱容量（尤其是 HLB/C18 小柱）。

正确做法：

·       参考厂家给出的吸附容量（mg/g），推算最大上样量；

·       上样流速一般控制在 1 mL/min 左右；

·       必要时分次上样或选用大容量柱。

📌 过柱≠倒水，吸附是需要时间的。

❌ 错误三：样品 pH / 离子强度未优化

常见问题：

·       忽略目标物 pKa，导致电离态不利于吸附；

·       水样直接上机，未调节 pH 或未加盐（离子强度影响保留）。

正确做法：

·       酸性化合物 → 酸性条件下（分子态）更易保留于 C18/HLB；

·       碱性化合物 → 碱性条件；

·       必要时加 NaCl 抑制极性干扰物。

📌 SPE 不是万能捕手，pH 决定留不留得住。

❌ 错误四：淋洗步骤“过度清洗"或“洗太轻"

常见问题：

·       淋洗液中有机相偏高 → 把目标物一并洗掉；

·       淋洗不足 → 基质干扰残留，色谱出现杂峰。

正确做法：

·       淋洗液目的是去除基质干扰但不洗脱目标物；

·       做方法验证时，建议做淋洗强度梯度实验确认安全窗口。

📌 淋洗是 SPE 里最容易被忽视、也最影响选择性的步骤。

❌ 错误五：洗脱溶剂种类/体积不匹配

常见问题：

·       洗脱能力偏弱（如只用 30% 甲醇洗强保留物）；

·       洗脱体积过小，未完整将目标物洗下。

正确做法：

·       通常先用 高有机（甲醇/乙腈）→ 必要时加酸/碱/氨水改性；

·       分次洗脱（如 2×1 mL 优于 1×2 mL）；

·       收集洗脱液后可氮吹复溶至确定体积。

📌 洗不下来 ≠ 没吸附，可能是洗脱条件不够“狠"。

✅ 小结

SPE 成功 = 合适的柱型 + 正确的活化平衡 + 优化的 pH/离子强度 + 合理流速 + 验证过的淋洗/洗脱条件。

新手常犯的错，大多集中在前三步。

把细节做对，回收率和 RSD 自然会乖乖听话。

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